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上樣緩沖液即loading buffer,是蛋白質(zhì)、核酸DNA與RNA的研究實(shí)驗(yàn)中溶解和添加樣品時(shí)所用的一類上樣緩沖液,蛋白質(zhì)、DNA、RNA是不同的樣品,其上樣緩沖液也有所區(qū)別。
蛋白上樣緩沖液的組成
其緩沖液主要采用Tris-HCl(三羥甲基氨基甲烷***)或Tris甘氨酸、與EDTA鹽(乙二胺四乙酸二鈉),還需添加SDS,DTT(二流蘇糖醇),溴酚藍(lán),甘油等。
蛋白、DNA、RNA的上樣緩沖液區(qū)別
SDS可與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷,這時(shí)蛋白質(zhì)本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵,破壞蛋白質(zhì)分子的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),消除了蛋白結(jié)構(gòu)之間的差異。最終無電荷及結(jié)構(gòu)上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關(guān)。溴酚藍(lán)用作電泳時(shí)的指示劑,可大概指示電泳結(jié)束的時(shí)間。
核酸上樣緩沖液的組成
核酸包括DNA與RNA,其上樣緩沖液主要含有Tris-HCl,以及染料二***青FF、溴酚藍(lán)(指示劑)等。指示劑溴酚藍(lán)和二******FF起到指示的作用是顯示電泳的進(jìn)程,以便我們適時(shí)終止電泳。DNA與RNA的上樣緩沖液基本可以通用,它們的堿基基本一致,緩沖液中的染料都可與其堿基結(jié)合,跑出條帶。不過,如果使用DNA上樣緩沖液,里面會(huì)夾雜一些RNA酶,這些酶有可能會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果,使用前需要將RNA酶處理掉。
需注意的是,雖然DNA與RNA的上樣緩沖液有時(shí)可以通用,但是它們與蛋白緩沖液是不能通用的。德晟是診斷試劑原料廠家,可提供蛋白與核酸研究相關(guān)的Tris、MOPS、CAPS等多種緩沖劑。