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緩沖溶液是包含弱酸及其共軛堿的水基溶液,由于緩沖液的化學(xué)性質(zhì),即使物質(zhì)發(fā)生化學(xué)變化,緩沖液也可以將它的PH值(酸度)保持在幾乎恒定的水平。緩沖液自然存在于血漿中,它保持血液PH值處于7.35-7.45之間。在有機(jī)系統(tǒng)中,天然緩沖液將PH值保持在一致的水平。但是在生物研究的過程中,必須通過緩沖液來保持PH值的不變。緩沖液種類繁多,Tris緩沖液是常用的生物緩沖液之一。
什么是 Tris 緩沖液?
Tris 是三(羥甲基)氨基甲烷的縮寫,這是一種常用于鹽水中的化合物,因?yàn)樗堑葷B且無毒的, pKa 為 8.1,pH 值介于 7 和 9 之間,因此 Tris 緩沖溶液也常用于一系列化學(xué)分析和生物研究中,包括 DNA 提取。重要的是要知道 tris 緩沖溶液中的 pH 值會(huì)隨溶液溫度而變化。
如何制備 Tris 緩沖液
制備Tris緩沖液非常簡(jiǎn)單,只準(zhǔn)備以下材料
三(羥甲基)氨基甲烷(TRIS)
蒸餾去離子水
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步驟
1、首先確定您想要制作的 Tris 緩沖液的濃度(摩爾濃度)和體積。例如,用于生理鹽水的 Tris 緩沖溶液從 10 到 100 mM 不等。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,通過將緩沖液的摩爾濃度乘以正在制作的緩沖液的體積來計(jì)算所需的 Tris 的摩爾數(shù)。(Tris 的摩爾數(shù) = mol/L x L)
2、接下來,通過將摩爾數(shù)乘以 Tris 的分子量 (121.14 g/mol) 來確定這是多少克 Tris 的克數(shù) = (摩爾) x (121.14 g/mol)
3、將 Tris 溶解到蒸餾去離子水中,達(dá)到所需最終體積的 1/3 到 1/2。
4、混入 HCl(例如 1M HCl),直到pH 計(jì)為您的 Tris 緩沖溶液提供所需的 pH。
5、用水稀釋緩沖液以達(dá)到所需的最終溶液量。