發(fā)光的機(jī)理

發(fā)光反應(yīng)中在形成電子激發(fā)態(tài)中間體之前，聯(lián)結(jié)于吖啶環(huán)上的不發(fā)光的取代基部分從吖啶環(huán)上脫離開來，即未發(fā)光部分與發(fā)光部分分離，因而其發(fā)光效率基本不受取代基結(jié)構(gòu)的影響。

水解機(jī)理

吖啶酯和吖啶酰胺在酸性溶液中(pH小于4.8)都很穩(wěn)定，該類化合物及其與蛋白的偶聯(lián)物在室溫下保存4周，其光量子產(chǎn)率不降低；凍干品在-20℃下，可保存一年以上。但當(dāng)pH大于4.8(尤其是在堿性溶液中),吖啶酯和吖啶酰胺類化合物由于發(fā)生部分水解而降低其穩(wěn)定性，水解機(jī)理。在水溶液中當(dāng)其受到OH-進(jìn)攻時(shí)生成一假堿，假堿繼續(xù)在OH-作用下酯鍵斷裂，最后生成N-甲基吖啶酮，水解過程為不發(fā)光的暗反應(yīng)過程。

不同點(diǎn)：

抵抗水解的能力不同

吖啶類化合物在水溶液中的水解程度，隨pH值增大而增大；隨溫度升高而增大。大多數(shù)吖啶酰胺類化合物的穩(wěn)定性較吖啶酯類高，其原因是由于C-N鍵與C-O鍵的鍵級不同,C-N鍵大于C-O鍵；吖啶酰胺類化合物抵抗水解的能力強(qiáng)于吖啶酯類。

熱穩(wěn)定性不同

對于吖啶化合物來說，吖啶環(huán)及酚環(huán)或苯磺酰環(huán)上，不連取代基與連接不同取代基其穩(wěn)定性不同。通常吖啶環(huán)或酚環(huán)或苯磺酰環(huán)上,連有甲基等取代基的吖啶酯或吖啶磺酰胺，由于空間位阻大的原因熱穩(wěn)定性增加，連有吸電子基團(tuán)時(shí)，因有利于親核取代反應(yīng)而使穩(wěn)定性降低。

相同點(diǎn)：

無需催化劑

吖啶酯或吖啶磺酰胺類化合物化學(xué)發(fā)光不需要催化劑，在有H2O2的稀堿性溶液中即能發(fā)光,具有許多優(yōu)越性，特別是無須一個(gè)催化過程，也不需要增強(qiáng)劑，從而降低了背景發(fā)光，提高了信噪比，干擾作用少。

易于與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)

該類化合物作為化學(xué)發(fā)光免疫分析的發(fā)光標(biāo)記物，還具有其它方面的優(yōu)點(diǎn),如光釋放快速集中、發(fā)光效率高、發(fā)光強(qiáng)度大，易于與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)且聯(lián)結(jié)后光子產(chǎn)率不減少、標(biāo)記物穩(wěn)定，在2-8℃下可保存數(shù)月之久，因此吖啶酯或吖啶磺酰胺是一類非常有效的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。

發(fā)光類型

這類化合物發(fā)光為閃光型，加入發(fā)光啟動試劑后,0.4s左右發(fā)射光強(qiáng)度達(dá)到最大，半衰期為0.9s左右。吖啶酯或吖啶磺酰胺類化合物應(yīng)用于CLIA,通常采用的體系是Acridiniumester/H2O2系統(tǒng)，即用吖啶酯或吖啶磺酰胺標(biāo)記抗體或抗原，用HNO3+H2O2和NaOH作發(fā)光啟動試劑。有些在發(fā)光啟動試劑中加入TritonX-100，CTAC，Tween-20等表面活性劑以增強(qiáng)發(fā)光。