DIO細(xì)胞膜綠色熒光探針
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DiO即DiOC18(3)，全稱為3,3′-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate，是最常用的細(xì)胞膜熒光探針之一，呈現(xiàn)綠色熒光。DiO是一種親脂性膜染料，進(jìn)入細(xì)胞膜后可以側(cè)向擴(kuò)散逐漸使整個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞膜被染色。
DiO在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，僅當(dāng)進(jìn)入到細(xì)胞膜后才可以被激發(fā)出很強(qiáng)的熒光。DiO被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，DiO和磷酯雙層膜結(jié)合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。其中，最大激發(fā)波長為484nm，最大發(fā)射波長為501nm。
DiO可以溶解于無水乙醇、DMSO和DMF，溶解度約為1-2.5mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時(shí)可以適當(dāng)加熱，并用超聲處理以促進(jìn)溶解。
DiO被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。DiO通常不會(huì)明顯影響細(xì)胞的生存力(viability)。DiO對于細(xì)胞膜染色的熒光強(qiáng)度通常要低于DiI，有時(shí)對于某些經(jīng)過固定的組織的染色效果欠佳。
DiO除了最簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移，通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散，檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。
用于細(xì)胞膜熒光標(biāo)記時(shí)，DiO的常用濃度為1-30μM，最常用的濃度為5-10μM。DiO可以直接染色活的細(xì)胞或組織，染色時(shí)間通常為5-20分鐘。對于固定的細(xì)胞或組織，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?huì)導(dǎo)致熒光背景較高。
保存條件：
4℃避光保存，一年有效。配制的儲(chǔ)存液-20℃避光保存，半年有效。
注意事項(xiàng)：
熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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