在Western Bloting實(shí)驗(yàn)中，可能存在總蛋白濃度測(cè)定不準(zhǔn)確，或者蛋白質(zhì)樣品在電泳前上樣時(shí)產(chǎn)生的樣品間的操作誤差；這些誤差可以通過(guò)測(cè)定每個(gè)樣品中實(shí)際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參，比如內(nèi)參GAPDH的含量來(lái)進(jìn)行校正。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)是

參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶，由4個(gè)30-40kDa的亞基組成，分子量146kDa，檢測(cè)條帶大約在36kDa。 GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水平表達(dá)，廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。

     供應(yīng)GAPDH抗體的進(jìn)口品牌有很多，像Abcam、Santa Cruz、Cell Signaling(CST)、Millipore等都有相關(guān)GAPDH抗體提供。但是由于不是專門(mén)的標(biāo)簽和內(nèi)參抗體供應(yīng)商，因此在性價(jià)比上不是最優(yōu)的選擇， 以Abcam為例，其一支100μl GAPDH抗體的RMB報(bào)價(jià)為￥3996；CST的一支100μl GAPDH抗體的報(bào)價(jià)是￥2774。

      另外，一些國(guó)內(nèi)的供貨商也能提供分裝的GAPDH抗體，但是在品牌和質(zhì)量保障上都有不足。國(guó)產(chǎn)分裝的GAPDH體在質(zhì)量穩(wěn)定性上有不足，并且經(jīng)過(guò)分裝以后，其效價(jià)也有損失。而原產(chǎn)于國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室的GAPDH抗體有些具有較好的檢測(cè)活性，但是在應(yīng)用類(lèi)型上有差距，并且在批次之間的穩(wěn)定性上較難控制，而國(guó)內(nèi)僅有的少量原產(chǎn)抗體也是多克隆抗體。如果您想買(mǎi)到一支性價(jià)比更高，同時(shí)也是原裝進(jìn)口品牌的GAPDH內(nèi)參抗體，那 EarthOx可能會(huì)是您的一個(gè)重要考慮選項(xiàng)之一。我們向您推薦EarthOx的GAPHD單克隆內(nèi)參抗體Anti-GAPDH Monoclonal Antibody [1D4](貨 號(hào)E021010)。

     該抗體單克隆抗體，克隆號(hào)為1D4。其抗原為純化的豬來(lái)源GAPDH蛋白，其檢測(cè)種屬非常的廣泛，可識(shí)別人、牛、豬、小鼠、大鼠等其它哺乳動(dòng)物，以及鳥(niǎo)類(lèi)的GAPDH蛋白，也算是一個(gè)真正保守的內(nèi)參抗體。另外，該抗體的效價(jià)非常高，WB實(shí)驗(yàn)推薦稀釋比率為 1:1000-1:10000，甚至有客戶報(bào)告更高的稀釋比率。

    除了100μl小包裝，EarthOx還提供大包裝500ug的GAPDH內(nèi)參抗體，非常適合經(jīng)常進(jìn)行內(nèi)參驗(yàn)證或校準(zhǔn)，或者進(jìn)行細(xì)胞骨架熒 光定位的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)需求。為方便客戶 的使用， 上述產(chǎn)品，EarthOx均在中國(guó)備有現(xiàn)貨。EarthOx針對(duì)中國(guó)市場(chǎng)，提供全球化的產(chǎn)品質(zhì)量追蹤和售后服務(wù)以及保障，如果您在使用過(guò)程中有任何問(wèn)題， 請(qǐng)直接與其當(dāng)?shù)卮砩贪澜菘萍加邢薰韭?lián)系。

    

    內(nèi)參抗體雖然選擇較多，但是也需要遵循一定的原則，并契合實(shí)際的應(yīng)用要求。首先，我們需要考慮目的蛋白的大小，我們推薦內(nèi)參要與檢測(cè)的目的蛋白的分 子量最好相差5KD以上，因此你需要根據(jù)你目的檢測(cè)蛋白的分子量來(lái)選擇合適的內(nèi)參，由于GAPDH的檢測(cè)分子量大約在36kD，因此該內(nèi)參抗體不是很適合用于檢測(cè)30kD-40kD大小目標(biāo)蛋白的WB實(shí)驗(yàn)中。另外，不同的組織來(lái)源的樣本在選擇內(nèi)參時(shí)還有一定的區(qū)別。比如某些細(xì)胞中，由于組織缺氧、糖尿病等因素會(huì)導(dǎo)致GAPDH的表達(dá)增高，不適合做內(nèi)參。

    因?yàn)闄z測(cè)的目的蛋白分子量在50kD左右，之前的β-Tubulin不是很適合，就購(gòu)買(mǎi)了一支EarthOx的GAPDH抗體做內(nèi)參，效價(jià)確實(shí)有點(diǎn)驚訝，我用1:1000倍起始稀釋覺(jué)得條帶很濃，后來(lái)一直到1:8000稀釋，同時(shí)減少了曝光時(shí)間，條帶仍然很清晰。——武漢大學(xué)生命科學(xué)院一客戶

     另外，我們還需要考慮自己的需要，特別是實(shí)驗(yàn)應(yīng)用上的需要。一般來(lái)說(shuō)，應(yīng)用類(lèi)型越多，在使用過(guò)程中的選擇余地就越大，而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性以及效價(jià)都要優(yōu)于多克隆抗體。 另外，抗體的效價(jià)也是考察該抗體性價(jià)比的重要方面，也即相當(dāng)于實(shí)際應(yīng)用時(shí)的稀釋比率。一個(gè)效價(jià)高的100μl GAPDH抗體(假如其WB檢測(cè)的稀釋比率是1:5000，最終使用液相當(dāng)于500ml)，要比效價(jià)低的1ml的GAPDH抗體(假如 WB檢測(cè)的稀釋比率是 1:200，最終使用液相當(dāng)于2ml)性價(jià)比更高。因此在選擇抗體的時(shí)候，不但需要考慮抗體的量，還需要考慮抗體的效價(jià)，即不同應(yīng)用的建議稀釋比率。

   美國(guó)EarthOx品牌是一家提供高性價(jià)比免疫學(xué)和細(xì)胞學(xué)科研產(chǎn)品及解決方案的品牌，艾美捷將其引入中國(guó)，作為其中國(guó)區(qū)域代理，將為客戶提供最具性 價(jià)比的常規(guī)免疫學(xué)試劑，如各種標(biāo)簽抗體、內(nèi)參抗體、常規(guī)一抗以及全系列二抗，抗體檢測(cè)底物以及相關(guān)試劑盒等。同時(shí)我們作為多家國(guó)際知名品牌的的中國(guó)代理或 區(qū)域代理，艾美捷能為您提供系列的實(shí)驗(yàn)室解決方案。如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，請(qǐng)致電027-84454412/59846291，或13317111952到艾美捷科技有限公司垂詢相關(guān)的產(chǎn)品信息及完整實(shí)驗(yàn)解決方案。

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