檢測GFP、EGFP、YFP、EYFP、CFP的GFP抗體
GFP是綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein)的簡稱,由238個氨基酸殘基組成。GFP蛋白質最早是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質,在藍色波長范圍的光線激發下,會發出綠色螢光。GFP或其突變體EGFP標簽系統等被廣泛用于基因表達效率的檢測,以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分布。我們都知道GFP抗體能應用于GFP的表達檢測、純化以及定位分析。那么該如何檢測GFP其他的一些突變體,如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表達和定位呢?
我們來看一下GFP標簽與其它突變體標簽的關系。YFP(Yellow Fluorescent Protein)是黃色熒光蛋白,其序列與GFP基本相同。YFP就是把Thr203以Tyr取代,這樣的GFP不發出綠色熒光,而發出較長波長的黃色熒光,也就是YFP。因此兩者最大的區別則是發射波長了,在其他序列上沒有區別。而EGFP是增強型的GFP,發生了雙氨基酸取代,Leu(亮氨酸)取代GFP上的Phe64(苯丙氨酸),Thr(蘇氨酸)取代了GFP上的Ser65(絲氨酸),與GFP相比,具有更強更穩定的綠色熒光。CFP(Cyan Fluorescent Protein)與此類似,也是GFP第66位上的酪氨酸Tyr被色氨酸(Thr)所取代的結果,發藍色熒光。由此可見,GFP標簽與其它突變體GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的類似,只有1-2個氨基酸殘基的變化。
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EarthOx GFP標簽抗體(#E022030)用于IF實驗 | EarthOx GFP標簽抗體(#E022030)用于WB實驗,1道為陰性對照,2道為1:1000倍稀釋 |
我們先看一下EarthOx的單克隆GFP抗體——Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody [GF28R](貨號#E022030),其免疫原是KLH偶聯的水母GFP蛋白的N末端多肽,由于EGFP、YFP、EYFP、CFP得N末端序列與GFP幾乎完全一致,因此從免疫原上來說,GFP與EGFP、YFP、EYFP、CFP沒有區別。更重要的是,EarthOx對于該單克隆抗體還進行了明確的驗證試驗,試驗也表明該Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody均能與GFP、YFP、EYFP、CFP等突變體有交叉反應,可以用于GFP、YFP、EYFP、CFP等熒光蛋白的表達定量、定位分析和檢測。EarthOx該GFP標簽抗體(貨號#E022030)的另一個優勢是,可用于的試驗類型很多,除了基本的WB、ELISA試驗外,還可以用于免疫細胞化學、免疫熒光(ICC/IF)、免疫共沉淀(IP)等。該抗體的效價很高,EarthOx的推薦WB起始稀釋比率為1:1000,實際應用于中還能有更優異的表現。因此,EarthOx的Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody [GF28R](貨號#E022030)不僅可以用于GFP,還能應用于GFP其他的一些突變體,如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表達和定位等實驗。更詳細信息,請點擊:EarthOx GFP標簽抗體。
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